Microbiología

PRÁCTICA N°3 DE MICROBIOLOGÍA

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE Escherichia coli y Salmonella spp

AGAR Mac Conkey: Medio selectivo para el aislamiento de enterobacterias.Las sales biliares y el violeta de cristal inhiben la flora Gram positiva, ya que se mezclan con la pared y membrana celular impidiendo su desarrollo. La lactosa junto con el indicador de pH rojo neutro, sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

AGAR Chromocult: medio selectivo diferencial, permite la detección, diferenciación y conteo de colonias tanto de E. coli como de coliformes. Contiene tergitol como inhibidor de las bacterias Gram positivas.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

NOTA:La Salmonella en  el agar SS ( salmonella-shigella), hace que por el  HS (hidrogeno sulfurado),  aparezcan en el medio unos puntos negruzcos. 

IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE Escherichia coli y Salmonella spp

TSI (Triple Sugar Iron): Presenta tres azúcares: sacarosa, lactosa y glucosa. Al ocurrir la degradación de cualquiera de los tres azúcares presentes, se forman ácidos que cambia el color del rojo de fenol a un color amarillo (inicialmente el color del medio es rojizo). Cuando no ocurre degradación de los azúcare, el color rojo será mas acentuado (+ alcalino).

·         La degradación de la lactosa ocurre en la parte superior (pico de flauta)

·         Sacarosa en la parte intermedia

·         Glucosa es fermentada en la parte profunda y en condiciones anaeróbicas.

 El tiosulfato presente en el medio se reduce a hidrógeno sulfurado para formar  sulfuro de fierro que es de color NEGRO. Cuando se forman burbujas es porque se forma gas (CO2) producto de la fermentación.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Para su interpretación se escribe
*K/K cuando el medio es todo rojo, es decir es alcalino y no ha ocurrido la degradación de algún azúcar.
*K/A cuando el medio es rojo pero en la profundidad es de color amarillo( ya que como es una Enterobacteria de hecho tiene que degradar un azúcar en este caso, la Glucosa.
*A/A cuando el medio es color amarillo es decir se han degradado los azúcares.
*Se coloca + o - dependiendo, es decir por ejemplo:
A/A +,+      ----->  el primer + significa que hay presencia de HS ( por lo cual es medio se torna un poco negro) y se coloca (-) en e caso que sea negativo; El segundo (+) significa que hay  burbujas, es decir presencia de un gas (CO2) como producto de la fermentación.
A/A -,-    -----> Significa que no hay HS ni burbujas
* Si hay muchas burbujas y el medio es bastante negro se incrementa los + + 

LIA (Lisina- Iron Agar): este medio de diferenciación permite evidenciar la descarboxilación del aminoácido lisina, la desaminación del mismo y la producción del ácido sulfhídrico cuando se identifican a las enterobacterias. Las reacciones anteriores se ponen de manifiesto mediante el viraje del indicador púrpura de bromocresol; y la formación de sulfuro de hidrógeno a partir del tiosulfato sódico, se manifiesta por la formación del sulfuro ferroso.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

AGAR CITRATO DE SIMMONS: este medio de diferenciación bioquímica, permite comprobar la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato como fuente exclusiva de carbono. Las sales de amonio presentes alcalinizan el medio y lo hacen virar de pH 7.0 a 8.0, el color verde del indicador pasa al color azul.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

CALDO PEPTONADO: la degradación del aminoácido triptófano contenido en la peptona, mediante una enzima produce un compuesto heterocíclico (el indol), el cual en presencia del paradimetil- amino-benzoaldehído, en medio ácido produce un compuesto complejo coloreado, soluble en solventes orgánicos, produciéndose un anillo de color rojo y el microorganismo es indol positivo.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

*Echericha Coli es INDOL positivo(+), ya que se formo el anillo de color rojo al estar presente la enzima TRIPTOFANASA, la cual es la que nos da este color ; mientras que Salmonella es INDOL negativo (-) al no estar presente la enzima TRIPTOFANASA.

IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE Escherichia coli.

>INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

*si la muestra se sale  ya sea por arriba o por abajo de la altura del control, entonces no se cuenta.